"Polimerase Chain Reaction" - PCR

Método que consiste no isolamento e amplificação de um segmento de DNA - envolve a produção "in vitro" de milhões de cópias do segmento em estudo. O processo exige a utilização de "primers" que isolam o segmento a ser amplificado, da enzima DNA Polimerase, e ocorre em 3 etapas:

• A desnaturação da dupla fita do DNA, em alta temperatura - 96ºC

• O "annealing" dos "primers", a baixa temperatura - 37º C

• Polimerização- duplicação do segmento isolado através da reacção da DNA polimerase

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O processo é cíclico e pode ser repetido muitas vezes, dependendo do grau de amplificação desejado. O "primer" pode ser sintetizado quimicamente, desde que se conheça a sequência a ser amplificada. Este é sempre adicionado em excesso ao meio de reacção. Se o segmento de DNA a ser amplificado não é conhecido, ele pode ser clonado a um vector cuja sequência de DNA adjacente ao recombinante seja conhecida. A DNA Polimerase utilizada é termoestável, e isolada do microorganismo Termus aquaticus (Taq Polimerase).